一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。
2） 置换成30％的PBST溶液，放置5分钟
3） 置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次
4） 置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟
5） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。
蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。
2） 用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。
4） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。
原位杂交技术在其他生物领域也有广泛的应用，例如：
植物学研究：在植物学研究中，原位杂交技术可以用于检测和定位特定基因的表达，研究基因组结构和进化。此外，还可以应用于植物染色体组型分析、基因组印记研究等方面。
微生物学研究：在微生物学领域，原位杂交技术可以用于研究细菌、病毒等微生物的基因表达和定位，以及它们在环境中的分布和相互作用。例如，通过标记特异性探针，可以检测肠道微生物群落中的特定，研究其在人体健康和疾病发生中的作用。
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